大腸桿菌是常見的細(xì)菌，對于人體是有害的，吉林TOC分析儀，在我們的飲用水中也會存在，要是長時間的飲用含有大腸桿菌的水，對身體會造成一定的傷害。對此，要檢查水中的大腸桿菌。本章水質(zhì)在線監(jiān)測儀廠家和分享關(guān)于飲用水中大腸桿菌檢測方法。

具體步驟如下：

1）水樣中微生物的收集及其dna的提?。?采用滅菌后的濾膜或?yàn)V器過濾水樣，在裝有無菌水的ep管中，洗滌濾膜，離心， 棄上清液，備用；

2）水樣中微生物dna的提?。?/p>

a、向ep管中加入te緩沖液，使之重懸；

b、加入sds和蛋白酶k，混勻，溫育45min～1h；

c、加入氯仿/異戊醇，混勻，離心，將上清液轉(zhuǎn)入一個新ep管中；

d、加入等體積的酚/氯仿/異戊醇，混勻，離心，將上清液轉(zhuǎn)入一個新ep管中；

e、加入異丙醇，輕輕混合直到dna沉淀下來，離心；

f、棄上清，沉淀物用乙醇洗滌，晾干；

g、將沉淀重溶于te緩沖液，搖勻；

h、用紫外分光光度計(jì)測定提取的基因組dna模板的0d值，計(jì)算其dna濃度，計(jì)算方 法為： dna濃度(μg/μl)=od值260nm×樣品稀釋倍數(shù)×50/1000 i、將基因組dna模板做好標(biāo)記，貯存，備用；

3）pcr擴(kuò)增；反應(yīng)引物：上游引物：5’-tgttcagtggcaagagtt-3’ 下游引物：5’-taatcgatatacccgctc-3’50μl反應(yīng)體系：10×pcr緩沖液5μl tag酶2u/μl1μl mgcl2(25mm)5μl dntp(2.5mm)5μl ddh2029μl 上游引物10μm2μl 上游引物10μm2μl 模板dna1.5μg/μl1μl

4）產(chǎn)物觀察：

a、凝膠的準(zhǔn)備：先配置瓊脂糖溶液，加熱，使其充分溶解，再加入溴化乙錠溶液；

b、配置tae電泳液；

c、倒膠：將配置好的瓊脂糖溶液倒入膠板中，待其凝固后，放入電泳槽中；

d、電泳：將擴(kuò)增好的pcr產(chǎn)物與緩沖液按比例混合，加入到凝膠加樣孔中，同時加入 dna分子量標(biāo)準(zhǔn)，接通電源，設(shè)定電壓和電流，開始電泳。

e、觀察；將擴(kuò)增產(chǎn)物在紫外光下觀察，拍攝圖片。

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